Wie zur Verbesserung Gel Filtration

Gel Filtration ist eine chromatographische Technik, die verwendet werden, um Moleküle in einer Mischung trennen aufgrund ihrer Partikelgröße. Wenn eine Probe auf eine Säule mit dem Gel gepackt Filtration Medium kleinere Moleküle in der Probe bewegen sich in den Poren des Filtermediums. Moleküle, die größer als diese Porengröße sind, können nicht in das Medium diffundieren und durch die Säule zuerst erscheint, in Flüssigkeit aus der Säule eluiert. Resolution - der Grad der Trennung der Komponenten in der Mischung - hängt von mehreren Faktoren ab, wie Probenvolumen Art der Filtration Spalte und ihre Fraktionierungsbereich. 

BESSER FILTRIERUNG

Wählen Sie eine geeignete Filtrationsmediums abhängig von der Art Ihrer Probe. Wählen Medien mit einem Fraktionierungsbereich, die Molekulargewichte von Komponenten, die in Ihrer Probe umfasst. Wenn viele Medien ähnlich Fraktionierungsbereiche haben, wählen Sie das mit der steilsten Selektivität Kurve für die Verwirklichung der bestmöglichen Auflösung.

Verwenden Sie mehrere Spalten in einer Reihe geschaltet sind, um die effektive Betthöhe erhöhen. Dies gewährleistet eine effizientere Trennung, vorausgesetzt, die Spalten jeweils die gleiche Trennmedium.

Bestimmen Sie die genaue Probenvolumen verwendet werden. Im Allgemeinen sollte jedoch nicht mehr als 2 Prozent des gesamten Säulenvolumens. Beginnen Sie mit einem Volumen von 0,5 Prozent und Testläufe bei steigenden Probenvolumina, um den Wert, die beste Auflösung ergibt finden. Vermeiden Sie die Verwendung Probenvolumina von weniger als 0,5 ml, weil niedrige Volumina beeinträchtigen Auflösung.

Konzentrieren Proben, bevor sie auf der Gelfiltrationssäule. Dies verbessert den Grad der Trennung, aber sicherzustellen, dass Sie Konzentrationen von weniger als 70 mg / ml mit Proteinproben, um Störungen aufgrund der Effekte von Viskosität zu verhindern.

Degas puffert Sie brauchen, um bei der Trennung durch Filtern sie unter einem Vakuum zu verwenden. Wenn Luftblasen die Filtration Spalte eingeben, wirken sie der Leistung der Säule.

Verwenden Sie die niedrigste mögliche Volumenstrom-Spitze vermeiden Verbreiterung. Broad Peaks zu Ergebnissen führen, die nicht so genau wie schmale.